应用Dicerl转基因小鼠建立黑色素瘤模型的研究

发布时间:2016-01-21    来源:实验动物与比较医学      
黑色素瘤是皮肤癌中最具侵袭性的恶性肿瘤⋯。近年来, 世界范围黑色素瘤 的发病率 以每年 3. 1% 的速度急剧上升。我国黑色素瘤病例增长加快,每年新发病例约 2 万例。目前,原位黑色素瘤术后5 年生存率超过 95%, 但是一旦发生转移, 则很难治愈, 而且预后极差, 5 年生存率不到 l0%。B 16 小鼠黑色素瘤细胞株是生长在C 57B L/ 6Jdx鼠的自发性肿瘤, C 57B L/6J 小鼠是研究 B 16 移植瘤和转移瘤最常用实验模型之一。肿瘤模型对研究肿瘤的病因、发病机制、抗癌药物筛选及肿瘤防治等具有非常重要 的意义 。目前有研究报道了D icerl 与黑色素瘤细胞增殖和侵袭能力的相关性, 本研究以D i cerl转基因小鼠为实验材料, 建立新的黑色素瘤模型, 为进一步探 讨黑色素瘤的发病 机制提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
实验动物: 5~6 周龄 SPF 级雌性 C57B L/ 6J 小鼠,来自中国医科大学实验动物部[SC X K (辽)2013一 OOO1],8~ 10 周龄 SPF 级雌性 D icerl 转基因小 鼠, 来 自中国医科大学实验动物部 。试剂: D M E M 、青霉素 、链霉素、PB S 均购 自G ibco 公司。细胞株: 小 鼠黑色素瘤细胞 B 16F0(实验室保存), 小鼠黑色素瘤细胞B 16F 10(中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)。
1.2 细胞培养
 小鼠黑色素瘤细胞系 B 16F0、B 16F 10 分别使用含体积分数 10 %胎牛血清的 D M E M 培养基 ,加
入100 IU /m L 青霉素、100 IU /m L 链霉素,37 。C 、体积分数 5% C O 恒温孵箱中培养 。使用质量分数0. 25% 的胰蛋白酶消化并中止后传代 ,取对数生长期 的细胞 进行实验。
1.3 动物实验
 D icerl转基因小 鼠和C 57B L/ 6Jd"鼠饲养于SPF环境, 24 ℃恒温, 光控(12 h 明112 h 暗),自由摄入水食[SY X K (辽)20 13— 0007】 。D icerl 转基因小 鼠随机分成 2 组 ,每组 4 只: D icerl 组 1(皮下注射 B 16F 0细胞)、D icerl 组 2(皮下注射 B 16F 10 细胞); C 57B L/6J 小 鼠随机分成 2 组,每组 4 只: C 57B L/ 6J 组 1(皮下注射 B 16F 0 细胞)、C 57 B L / 6J 组 2 (皮下注射B 16F 10 细胞 )。
1.4 成瘤情况观察
 肿瘤 细胞 腋下 皮 下注射 后 ,每 日观 察注射部位 , 出现可触及 的肿块 时记为肿瘤 出现 时问 ,每 日测 量 肿 瘤 最长 径 (L )和垂 直 方 向最大 横 径(W ),计算肿瘤 体积:V = L W 2/ 2 ;肿瘤 生长 速度以肿 瘤每天 增长 的体积 计算 。待小 鼠状态 变 差 ,处死 小 鼠,取材 。 
 
要的作用。本研究成功的应用 D icerl 转基因小 鼠建立黑色素瘤模型, 为进一步研究 D icerl 在黑色素瘤发 生、发展 中的分子生物学机制奠 定了基 础 。


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